Тесты для идентификации культуры.

1. Морфология возбудителя.

Грам - . «Стая рыб». Подвижны. Монотрихи.

2. Рост на питательных средах.

1% пептонная вода – голубая пленка.

Щелочной агар – среднии колонии голубоватого цвета.

Среда TBRS – колонии желтого цвета.

3. Изучение антигенных свойств.

4. Сахаролитические свойства.

Лактоза, арабиноза, дульцит –

Глюкоза, сахароза, манит, манноза, мальтоза → к

5. Протеолитические свойства.

Разложение желатина, пептонизация молока +

Разложение мочевины (V. cholerae +, V. eltor - )

6. Проба на оксидазу.

Оксидаза +

7. Чувствительность к фагам.

Ускоренные методы

Реакция иммобилизации. На предметное стекло наносят 2 капли испражнений или материала с поверхности пептонной воды. К 1-ой капле добавляют одну каплю О-сыворотки (1:100), ко 2-ой – каплю физ раствора. Каждую каплю эмульгируют пастеровской петлей или пипеткой, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом. При положительном результате в первой капле прекращается движение вибрионов, во второй наблюдается движение.

Люминисцентно-серологический метод.

Тесты для идентификации культуры.

1. Морфология возбудителя.

Грам - . Капсула. Полиморфны. Биполярность (окраска метиленовым синим).

2. Рост на питательных средах.

МПА – через 48 часов «кружевной платочек».

МПБ – «сталактитовый рост»

Скошенный агар – вязкий серый налет

3. Изучение антигенных свойств.

4. Сахаролитические свойства.

Мальтоза, арабиноза, глюкоза (не всегда), маннит → к

Сахароза, рамноза -

5. Протеолитические свойства.

Разложение желатина, свертывание молока - . H₂S +

6. Биологическая проба.

7. Чувствительность к фагам.

Дифференциация возбудителей чумы

от возбудителя псевдотуберкулеза.

Признаки	Возбудитель чумы	Возбудитель псевдотуберкулеза
Подвижность Рост на голодной среде Чумной бактериофаг Расщепление рамнозы Образование мочевины Свертывание молока Лакмусовое молоко Фибринолитические св-ва Патогенность для животных	Неподвижен Не растет Лизируется - - - Медленное ощелачивание Обладает Убивает морских свинок и крыс	Подвижен Растет Не лизируется + + + Быстрое ощелачивание Не обладает Морских свинок убивает, крыс не убивает

Тесты для идентификации культуры.

1. Морфология возбудителя.

Грам - . Не подвижны. Окраска по Романовскому – нежно-фиолетовые

2. Аллергическая проба.

Пробу ставят на 3– 5день заболевания.

а) накожный метод: тулярин (1 мл – 10 млрд. убитых микробных клеток). Пробу ставят на наружной поверхности плеча. Положительная реакция – гиперемия и отечность вокруг насечки диаметром 1–2 см через 48–72 часа.

б) внутрикожный метод: взвесь убитых бактерий (1 мл – 500 млн. микробных клеток). Пробу ставят на ладонной поверхности предплечья. Положительная реакция – отечность и гипермия через 24 – 48 часов.

3. Серологическая диагностика.

Линейная реакция агглютинации: 2 – 3 мл крови из локтевой вены берут в пробирку. Полученную сыворотку разводят 1:50 до 1:1600. Диагностическим титром является положительный результат реакции в разведении сыворотки от 1:100 и выше. Антигеном служит туляремийный диагностикум – убитая формалином взвесь бактерий (1 мл – 25 млрд. микробных тел).

РНГА: сыворотку разводят от 1:100 до 1:10000. Антиген – туляремийный эритроцитарный диагностикум. Диагностическим титром считают титр 1:100 и выше.

4. Биологическая проба.

5. Люминисцентно-микроскопический метод.

Тесты для идентификации культуры.

1. Морфология возбудителя.

Грам - . Не подвижны. Капсула. В мазке располагаются беспорядочно.

2. Бактериологический метод.

Производят посев крови во флаконы, в которые наливают по 30 – 50 мл агара. В каждый флакон заливают по 25 – 30 мл простерилизованного бульона. Эту среду выдерживают в термостате 2 – 3 дня, после чего добавляют по 5 мл в каждый флакон. При положительном результате на поверхности появляются колонии – мелкие, бесцветные, выпуклые с зернистостью.

3. Серологическая диагностика.

Реакция Райта. Берут 1 – 2 мл крови из пальца. Получают сыворотку. Разводят 1:25 до 1:1600. Диагностическим титром является положительный результат реакции в разведении сыворотки от 1:100 и выше (при титре 1:400 – реакция резко положительная). Антигеном служит туляремийный диагностикум – убитая культура бруцелл.

4. Аллергическая проба.

Внутрикожно в ладонную поверхность предплечья вводят 0,1 мл бруцеллина. Результат реакции учитывают через 24 – 48 часов. Положительная ракция характеризуется отеком и гиперемией размером 46 см.

5. Биологическая проба.

6. Метод иммунофлюоресценции.

Тесты для идентификации культуры.

1. Морфология возбудителя.

Грам + . Не подвижны. Капсула. Спора.

2. Рост на питательных средах.

МПА – «голова медузы» или «львиная грива»

МПБ – придонный рост в виде «комка ваты»

Желатин – «перевернутая елочка»

3. Изучение антигенных свойств.

4. Сахаролитические свойства.

Глюкоза, лактоза, мальтоза, левулеза → к

5. Протеолитические свойства.

Разложение желатина, пептонизация молока +

Медленное свертывание молока. H₂S + . NH₃ + .

6. Гемолитические свойства.

Не вызывает гемолиз, в отличии от антракоида.

7. Чувствительность к фагам.

8. Биологическая проба.

9. «Жемчужное ожерелье»:

К бульону Хоттингера прибавляют 30% инактивированной сыворотки и пенициллин из расчета 0,5 ЕД на 1 мл бульона. 3 часа в термостате. Делают мазок. Фиксируют жидкостью Карнуа (этиловый спирт, хлороформ и ледяная уксусная кислота). Окрашивают метиленовым синим и микроскопируют. Результат действия пенициллина – цепи шаров, на поминающих «жемчужное ожерелье».

10. Аллергическая проба.

Внутрикожно на внутренней поверхности предплечья вводят антраксин. Реакцию учитывают через 24 – 48 часов. Положительная реакция проявляется с первых дне заболевания.

10. Реакция Асколи.

Приготовление антигена: исследуемый материал измельчают, заливают 25 – 50 кратным объемом физ раствора и кипятят. Полученный экстракт фильтруют. Для реакции используют преципитирующую сибиреязвенную сыворотку и для контроля сибиреязвенный антиген.

Постановка реакции:

1-ая пробирка – преципитирующая сыворотка + исследуемый термоэкстракт;

2-ая пробрка – преципитирующая сыворотка + стандартный сибереязвенный антиген (контроль);

3-я пробирка – преципитирующая сыворотка + термоэкстракт из шерсти здорового живтного (контроль).

При положителной реакции первых 2 пробирках образуется преципитационное кольцо, а в 3 – кольцо отсутствует.