Реферат на тему Химико-фармакологическое исследование лопуха войлочного
Работа добавлена на сайт bukvasha.net: 2015-06-29Поможем написать учебную работу
Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Аннотация Мику Мохамед Тема: Химико - фармакологическое исследование лопуха войлочного. Руководитель: доцент кафедры фармакологии к. ф. н. Дудко В. В. Цель работы: Проведение химико - фармакологического исследования лопуха войлочного. Задачи: 1. Определить товароведческие показатели листьев лопуха войлочного. 2. Получить жидкие экстракты из листьев лопуха войлочного на 25, 40, 70% этаноле и провести их стандартизацию. 3. Провести исследование противовоспалительной активности. 4. Провести выделение сесквитерпеновых лактонов. Научная новизна: 1. Проведено сравнительное исследование противовоспалительной активности спиртовых экстрактов и водного извлечения. 2. Проведено выделение сесквитерпеновых лактонов. Практическая значимость: 1. Получены спиртовые экстракты. 2. Спиртовый экстракт листьев на 70% этаноле проявил в клинических условиях противолямблиозную активность. 3. Все экстракты проявляют противовоспалительную активность, но сухой экстракт корней на 70% этаноле оказался более эффективным при хроническом воспалении, а сухой экстракт листьев на 25, 40% этаноле - при остром асептическом воспалении. Выводы: 1. Определены товароведческие показатели листьев лопуха войлочного. 2. Получены жидкие экстракты на 25, 40, 70% этаноле и проведена их стандартизация. 3. Проведено исследование противовоспалительной активности экстрактов из корней и листьев и водного извлечения из листьев. 4. Проведено выделение сесквитерпеновых лактонов. МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФСИБИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ ХИМИИ И ТЕХНОЛОГИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ Мику Мохамед Химико – фармакологическое исследование лопуха войлочного Дипломная работа
Дипломник _____________________ (Подпись) ТОМСК – 1999 Содержание Часть 1. Литературный обзор___________________________________________ 1.1. Систематическое положение и ботаническое описание растений рода лопух, распространение____________________________________________ 1.2. Химический состав листьев лопуха_______________________________ 1.3. Применение травы лопуха в народной медицине, результаты клинических испытаний___________________________________________ 1.4. Характеристика лямблиоза______________________________________ Часть 2. Экспериментальная часть_______________________________________ 2.1. Характеристика товароведческих показателей листьев лопуха войлочного______________________________________________________ 2.2. Разработка рациональной лекарственной формы из листьев лопуха войлочного______________________________________________________ 2.2.1. Получение жидких экстрактов из листьев лопуха войлочного (1 : 1) на 25, 40, 70 % этаноле_______________________________ 2.2.2. Стандартизация жидких экстрактов из листьев лопуха войлочного на 25, 40, 70 % этаноле______________________________ 2.3. Исследование противовоспалительных свойств сухих экстрактов листьев и корней, полученных на 25 %, 40 %, 70 % этаноле, сухого водного раствора, извлеченного из листьев лопуха войлочного__________________ 2.3.1. Характеристика воспалительного процесса__________________ 2.3.2. Материалы и методы исследования_________________________ 2.3.3. Результаты исследования_________________________________ Часть 3. Выделение сесквитерпеновых лактонов___________________________ 3.1. Общая характеристика_________________________________________ 3.2. Распространение в растительном мире____________________________ 3.3. Локализация в растениях_______________________________________ 3.4. Классификация_______________________________________________ 3.5. Физико - химические свойства___________________________________ 3.6. Методы выделения и разделения сесквитерпеновых лактонов________ 3.7. Выделение сесквитерпеновых лактонов из листьев лопуха войлочного_ 3.8. Хроматографическое исследование суммы лактонов из листьев лопуха войлочного______________________________________________________ 3.9. ИК - спектроскопия суммы лактонов фракций 3 - 6 из листьев лопуха войлочного______________________________________________________ Выводы_________________________________________________________ Приложение. Таблицы по противовоспалительной активности___________ Список литературы_______________________________________________ Введение В последние годы интерес к лечению лекарственными растениями - фитотерапии - значительно возрос. В начале нашего века лекарственные растения составляли до 80 % всех используемых лекарственных средств, но затем синтетические, антибиотические, гормональные и др. препараты значительно их потеснили. Однако, несмотря на поразительные успехи в создании синтетических препаратов, лекарства из растений продолжают занимать важное место в современной научной медицине. Преимущество фитопрепаратов состоит в том, что они содержат комплекс действующих веществ, хорошо переносимых больными. Эти препараты богаты компонентами, которые способствуют всасыванию в пищеварительном тракте БАВ, обеспечивают жизнедеятельность клеточной протоплазмы, связь клеток с медиаторами нервной системы, усиливают ферментативную активность, улучшают проницаемость и эластичность тканей, способствуют выведению токсических веществ из организма. К числу лекарственных растений, недостаточно изученных и популярных в народной медицине, относится лопух, широко распространенный во флоре Западной Сибири как сорное растение с приличной биомассой. Задачей работы является проведение следующих исследований: 1) Определить товароведческие показатели листьев лопуха войлочного. 2) Получить жидкие экстракты из листьев лопуха войлочного на 25, 40, 70% этаноле и провести их стандартизацию. 3) Провести исследование противовоспалительных свойств. 4) Провести выделение сесквитерпеновых лактонов. Новизна работы. 1) Проведено исследование противовоспалительной активности спиртовых экстрактов и водного извлечения. 2) Проведено выделение сесквитерпеновых лактонов. Практическая значимость. 1) Получены спиртовые экстракты. 2) Спиртовый экстракт листьев на 70 % этаноле проявил в клинических условиях противолямблиозную активность. 3) Все экстракты проявляют противовоспалительную активность, но сухой экстракт корней на 70 % этаноле оказался более эффективным при хроническом воспалении, а сухой экстракт листьев на 25, 40 % этаноле при остром асептическом воспалении. Часть 1. Литературный обзор
Семейство Сложноцветных ASTERACEAE, насчитывающее около 1000 родов и более 20000 видов (Melchior, 1964, Тахтяджан, 1966), широко представлены на всех континентах и во всех климатических зонах земного шара. Во всех флористических регионах СНГ сложноцветные составляют значительную часть флоры. Обширность и неоднородность семейство ASTERACEAE затрудняет целенаправленный поиск того или другого класса природных соединений среди составляющих это семейство таксономических групп и не позволяют дать однозначной оценки перспективности в том или ином направление не только всего семейства, отдельных его триб или подтриб, но даже родов и их секций (Рыбалко К. С. и др., 1975). Род ARCTIUM, семейство сложноцветных (Крылов П. Н., 1949) - средиземноморский по своему происхождению. На территории СНГ произрастает 8 из 11 видов этого рода. За лектотип рода принят вид А. lappa (Штэпа И. С., 1973). По систематическому положению, он занимает промежуточное положение между родами Атрактилодес (ATRACTYLODES DS) и Анура (ANURA JUS TS CHER) (Юзепчук С. В., Сергиевская Е. В., 1962). В свою очередь, родовое латинское название ARCTIUM, произошло от древнегреческого "arctos", обозначающего север или медведь, lappa - переводится как "северный или медвежий репейник". Русское название "лопух" произошло от древнерусского слова "лоп" - лист. Виды этого рода - широколиственные мезоморфные травы, преимущественно сорные, рудеральные, распространенные весьма широко, главным образом, в более северных, умеренно - влажных лесных областях, некоторые обитают во влажных и тенистых лесах и никогда не встречаются в засушливых условиях (Пайзиева С. А., 1962). На территории Западной Сибири произрастает два вида лопуха: Arctium tomentosum Mill. и Arctium lappa L (Крылов П. Н., 1949). Arctium tomentosum Mill. (лопух войлочный) Растение 60 - 150 см высотой, корень мясистый, толстый, веретенообразный, коричневый; стебель прямостоящий, мощный, продольно бороздчатый, зеленый или красноватый, ветви многочисленные, прямостоящие оттопыренные, реже (в затененных местах) несколько дугообразно отогнутые, покрытые, как и стебель, сосочковидными волосками с примесью железок и паутинисто - опушенные; листья черешчатые, яйцевидные, с сердцевидным основанием до широкосердцевидных, цельнокрайние или раставленно зубчатые, на верхушке тупые, с насаженным остроконечном, сверху зеленые, голые или слегка опушенные прижатыми волосками, снизу густо, серовато- или беловато -паутинисто - войлочные, усаженные сидячими золотистыми железками, верхние листья на коротких черешках, яйцевидные или яйцевидно - продолговатые, черешки прикорневых листьев выполнен сердцевиной, войлочные, нередко красновато - коричневые. Общее соцветие щитковидное, корзинки располагаются приблизительно на одном уровне многочисленные, шаровидные, слабо стянуты на верхушке, считая без остроконечий - 11 - 18 мм шириной, с остроконечиями - 18 - 30 мм, 13 - 20 cм высотой, по созревании легко распадающиеся, сильно паутинисто опушенные или очень редко совсем лишены опушения; средние листочки обертки снаружи покрыты мелкими, короткими, прилегающими волосками иногда с примесью железок, по краю реснитчато - зубчатые, самые нижние листочки обертки короткие, с резко вниз направленными, недлинными остроконечиями, заканчивающимися крючком; нижние листочки обертки ланцетовидные, килеватые, у основания расширенные, от 1.25 до 1.5 мм шириной, переходящие в линейно-ланцетное, горизонтально отстояще остроконечие, оканчивающееся крючком, самые внутренние листочки обертки пурпуровые, расширенные у основания до 2.75 мм ширине линейно - ланцетные, туповатые или выгрызенные, с маленьким насаженным остроконечием, но не крючковидным; нередко все листочки обертки пурпуровые, венчик значительно длиннее внутренних листочке обертки, красновато - пурпуровый, покрытый рассеянными желтоватым железками, колокольчатый, к верху расширенный, трубка 4.5 - 6 мм длиной при основании расширенная, отгиб 4 - 5.5 мм длиной, из которых на долю лопастей приходится 2 - 2.5 мм, верхние придатки пыльников более менее внезапно оттянуты на верхушке в остроконечие 0.2 мм длиной, нижние придатки 0.6 мм длиной, простые или 2 - раздельные; семянки 5 - 6 м длиной, обратноконические, с тупо срезанным верхним концом и узкой площадкой прикрепления хохолка, гранистые, поперечно морщинистые серовато - коричневые, бурые или с темными зигзагообразными пятнами на более светлом фоне; хохолок 2.5 - 3 мм длиной. Распространение: Европейская часть - Прибалтика, Лад. - Ильм., Дв. - Печ., Волж. - Кам., Верх. - Волж., Верхн. - Днепр., Сред. - Днепр., Кар. - Лапл., Волж. - Дон., Заволж., Ниж. - Дон., Верх. - Днестр., Причерн., Бесс., Крым; Кавказ; Зап. Сибирь - Томск, в дол. Р. Обь от Каргаска до г. Новосибирска с. Бердского, в сист. рек Кондомы, Мрассу, Томи, Верх. Таб., Ирт., Обск., Алт.; Вост. Сибирь; Дальн. Восток; Ср. Азия. 1.2. Химический состав растений рода лопух. Что касается химического состава лопуха, то он изучен недостаточно. Имеется информация по отдельным группам биологически активных веществ, обнаружены: жирные масла, горькие вещества, аскорбиновая кислота, слизи, минеральные соли (Минаева В.Г., 1991, Лагерь А.А., 1992), а также эфирное масло (Растительные...,1993). Семена лопуха войлочного содержат: жирные масла - 22.1 %; кислоты: миристиновая, пальмитиновая, стеариновая, олеиновая, линолевая - 67.8 % ; триацисзицеролы коронаровой, верноловой, цис - 9, 10 - эпоксиоктадекановой и транс - 9, 10 - эпоксиоктадекановой кислот; высшие алифатические тритерпеновые спирты, стероиды, ацилглицеролы (Растительные..., 1993). Помимо лопуха войлочного, есть другие виды похожие на него по химическому составу: это лопух малый и лопух большой. В листьях лопуха большого так же как и у войлочного обнаружены жирные масла, горькие вещества, аскорбиновая кислота, слизи, минеральные соли. Известно, что количественное содержание жирных масел в лопухе большом составляет 0.4 - 0.8 % (Минаева В.Г., 1991; Лагерь А.А., 1992); а также содержатся горькие вещества, вероятно сесквитерпеновые лактоны и эфирные масла. В лопухе большом идентифицирована пальмитиновая кислота, входящая в состав эфирного масла (Растительные..., 1993). Содержатся еще углеводы: моно и дисахариды до 22 %, дубильные вещества 3,4 - 8 %, фенолкарбоновые кислоты и их производные: кофейная, хлорогеновая, изохлорогеновая, флаваноиды до 5.7 - 18 % (Римкенс С.П. Биологические особенности...,1986). В плодах лопуха большого содержатся органические кислоты: яблочная, лимонная, алкалоиды, сапонины, кумарины, фенолкарбоновые кислоты и их производные: кофейная, хлорогеновая, изохлорогеновая; лигнаны: арктиин, арктигенин, металрезинол, лигнаны AL - D и AL - F. Семена лопуха большого содержат очень мало лигнанов: ( - ) - арктигенин, лоппаол А, лоппаол B, (Растительные...,1993), лигнановый гликозид - арктиин (Блинова К.Ф., Яковлева Г.П., 1990). В семенах лопуха малого содержатся жирные масла - 21.4 %, представленные кислотами (в %): пальмитиновая - 9 %, пальмитооленовая (гексадецен 9 - овая) - 0, 9, стеариновая - 1 %, олеиновая - 20.3 %, линолевая - 67 %, леноленовая - 1.7 %, миристиновая. Высшие жирные кислоты: октадекатриен - 3, транс, 4 - цис, 12 - овая - 9.9 % (Растительные...,1993). 1.3 Применение травы лопуха в народной медицине, результаты клинических испытаний Уже в древности лопух отмечали как лекарственное растение. В своей работе "Materia medica" его упоминает Диоскорид. Из летописей известно, что в лекарственных целях широко использовал лопух врач Александра Невского (Кузнецова М.А., Резникова А.С., 1992). Из этого следует, что обширное распространение, наличие приличной биомассы, разнообразный спектр действия обусловили широкое использование растений рода лопух в народной медицине, причем наиболее распространенные - лопух войлочный, лопух большой, лопух малый применяются равнозначно (Растительные..., 1993). Химический состав определяет биологическую активность: так в народной медицине используют листья лопуха для лечения опухоли путем прикладывания их к пораженным местам (Ковалева Н.Г., 1972). Лопух применяют при простудных заболеваниях (Петкова В.,1982), а также при начальных формах заболеваний верхних дыхательных путей (бронхов, легких); при отеках горла применяют свежие листья или сок консервированный на 40 % этаноле, прикладывают к горлу как компресс (Попов А.П., 1993). Свежие листья вместе с листьями мать - мачехи прикладывают к груди при мастите (Петкова В.,1993). Листья, смазанные свежей сметаной применяют при рожистом воспалении, больного обертывают на ночь простыней, смоченной в настое в течении 2 - 3 недель. Таким способом лечат и рецидивирующий ревматизм. При воспалении слизистых оболочек (рта, десен, горла, внутренних женских половых органов, при гингивитах, стоматитах) полезен свежий сок, можно и консервированный на 40 % этаноле, разведенный 1 : 10, в виде полоскания. В последнем случае полезно и внутрь принимать этот же сок, но не разведенный, по 20 капель 3 раза в день. Для лечения воспалительных заболеваний полости рта сок из свежих листьев лопуха используется в виде полосканий, промываний, примочек (Пашинский В.Г., 1989; Лагерь А.А., 1992). Установлено антибактериальное действие свежих листьев, они улучшают обменные процессы в организме, рекомендуются при трофических язвах, их используют при лихорадке (Минаева В.Г.,1991), а также лопух используют как наружное средство для снятия высокой температуры, накладывая свежие листья на тело. Лопухом лечат головную боль воспалительного характера и мигрень, при этом свежие листья прикладывают к голове (Петкова В.,1982; Полов А.П.,1993). Свежими листьями (нижней стороной) оборачивают суставы при ломоте, ревматизме, подагре, при радикулите в течении всего весенне - летнего периода (Ковалева Н.Г.,1972; Петкова В., 1982). Применяется также при лечении артритов, в основном используется наружно в виде компрессов, втираний, обертываний свежими листьями и ванн (Пашинский В.Г., 1989). Их используют в китайской медицине как противоядие,при укусах ядовитых змей и других насекомых. Очень интересно применение лопуха в народной медицине для лечения опухолей. Отвар листьев лопуха малого, собранного во время цветения, пьют в Белоруссии как чай при злокачественных опухолях (Балицкий К.П., Воронцова А.Л.,1982; Растительные...,1993). Так же сок из растения самостоятельно и в сочетании с соком других растений - хорошее профилактическое средство от рака, особенно в пожилом возрасте (Решетняк В.В., Цигура Н.В.,1992). Лопух применяют как средство для лечения почечно - каменной болезни, он способствует растворению и выведению камней из почек и мочевых путей (Гриневич М.А.,1990; Пашинский В.Г.,1989). Используют лопух при глистах (Решетняк В.В., Цигура Н.В.,1992). При кожном зуде прикладывают листья, смоченные или растертые в молоке. В народной медицине отвар, настой используют при гипертиреозе. Он применяется при асците, энтероколитах, сопровождающихся запорами, остеохондрозе, вагините, кольпите, как лактогенное и антиалкогольное средство. Лопух войлочный обладает антиоксидантными свойствами (Растительные...,1996). Отвар лопуха эффективен при запорах (10 : 250). Одну чайную ложку семян лопуха настаивают несколько часов в 250 - 500 мл воды, потом кипитят 5 - 7 минут и выпивают в течении дня (Губергриц А.Я. и Сололченко Н.И.,1990; Петкова В.,1982). Семена рекомендуются как популярное народное средство, оздоравливающее весь организм, в через то формирующий и стул. Кроме того, если употреблять семена, обладающие слабительным действием, они будут увеличивать эффект. Применяют лопух при различных заболеваниях: желудочно - кишечных, заболеваниях печени, почек, мочевого пузыря, ревматизме, подагре, водянке, золотухе, рахите, сахарном диабете, а так же как ранозаживляющее, кровоочистительное, мочегонное, потогонное средство, для регуляции обмена веществ. Результаты апробации экстракта из листьев лопуха войлочного на 70 % - ном этаноле на противолямблиозную активность на 14 детях от 3 до 14 лет показали высокую эффективность препарата. 1.4 Характеристика лямблиоза |
|
2.2.1. Получение жидких экстрактов из листьев лопуха войлочного (1:1) на 25, 40, 70 % этаноле Жидкий экстракт лопуха войлочного (1 : 1) получают методом реперколяции по Н. А. Чулкову в батарее из 5 - ти перколяторов с законченным циклом. В каждый перколятор загружают по 50 г листьев. “На зеркало” затрачено 370 мл 25 %, 40 % и 70% этанола, что соответствует содержанию безводного этанола 92.5 , 148.0 и 259.0 мл. На ложное дно подготовленного перколятора загружают 50 г предварительно замоченного сырья, слегка утрамбовывают и подают экстрагент до зеркала, настаивая 24 часа. На 2 - ой день во 2 - ой перколятор загружают 50 г, предварительно замоченного экстрактом из 1 - го перколятора сырья. Из ранее загруженного перколятора №1 вытесняют свежим экстрагентом извлечение и подают его на загруженное сырье перколятора № 2. Уровень зеркала в перколяторах № 1 и 2 выравнивают. Настаивают 24 часа. Аналогично вышеописанному загружают перколяторы № 3 и № 4 на 3 - ий и 4 - ый день работы. На 5 - ый день в перколятор № 5 загружают 50 г сырья, заливают его извлечением из перколятора № 4, делая передвижку из перколятора № 4 в перколятор № 5, из № 3 в № 4, из № 2 в № 3, из № 1 в № 2. В первый перколятор подают свежий экстрагент. Все пять перколяторов залиты до зеркала и настаивают 24 часа. С шестого дня начинается рабочий период. Из первого перколятора сливают и регенерируют этанол, промывая шрот водой. Шрот выгружают и подготавливают перколятор № 1 к новой загрузке. Производят передвижку извлечений. В № 1 загружают 50 г сырья и заливают извлечением перколятора № 5. Перколятор № 1 становится головным, а перколятор № 2 - хвостовым. Для максимального извлечения действующих веществ из листьев лопуха перколятор № 2 заливают свежим экстрагентом и передвигают в перколятор № 3. После чего перколятор № 2 отключают от батареи на регенерацию этанола и выгрузку шрота. Аналогично загрузке перколятора № 1 загружают перколяторы № 2, 3, 4, 5. В продолжение всей работы рабочего периода один перколятор находится под выгрузкой истощенного сырья и загрузкой свежего. Свежий экстрагент всегда поступает в "хвостовой" перколятор с максимально - истощенным сырьем. Концентрированное извлечение сливают с головного перколятора со свежим растительным материалом. Все диффузоры последовательно становятся "хвостовыми" и "головными". Выход жидкого экстракта лопуха с одного перколятора состовляет 50 мл. Остановочный период. По окончании технологического процесса производства жидкого экстракта лопуха "хвостовые" перколяторы отключают, но новых перколяторов со свежим сырьем не включают. С каждого перколятора ежедневно сливают слабые извлечения, которые собирают отдельно и используют при последующих загрузках в производстве жидкого экстракта лопуха. Полученные экстракты (1:1) в объеме 500 мл, изготовленные на 25 %, 40 % и 70 % этаноле, отстаивают 2 - 3 дня при 8 - 12° С, фильтруют и подвергают стандартизации по содержанию этанола, сухого остатка, тяжелых металлов (Новицкая С. Я., Борзунов Е. Е., Сафиулин Р. М., 1969) 2.2.2. Стандартизация жидких экстрактов листьев лопуха войлочного на 25, 40, 70 % этаноле Описание: жидкость со специфическим запахом, горького вкуса. 25 % экстракт имеет окраску коричневого цвета с красноватым оттенком. У 40 % экстракта буро - коричневый цвет, 70 % экстракт темно - коричневого цвета. 2.2.2.1. Определение концентрации этанола в жидком экстракте листьев лопуха В круглодонную колбу вместимостью 200 - 250 мл отмеривают точное количество экстракта. При содержании этанола выше 50 % отмеривают 25 мл жидкого экстракта, которые перед отгонкой разбавляют водой до 75 мл. Для равномерного кипения в колбу с жидкостью помещают капилляры, пемзу или кусочки прокаленного фарфора. Приемник (мерную колбу вместимостью 50 мл) помещают в сосуд с холодной водой, собирают около 48 мл отгона, доводят его температуру до 20 С и добавляют воды до метки. Отгон должен быть прозрачным или слегка мутным. Плотность отгона определяют денсиметром или с помощью пикнометра при температуре 20 С и по алкоголиметрической таблице № ГФ XI находят соответствующее содержание этанола в процентах по объему. Содержание этанола (X) в процентах по объему вычисляют по формуле: Х = 50 * а / б, где 50 - объем отгона в мл, а - содержание этанола в процентах по объему, б - объем исследуемого экстракта, взятый для отгона, мл. 2.2.2.2. Определение плотности жидкого экстракта Чистый сухой пикнометр взвешивают с точностью до 0.0002 г, заполняют с помощью маленькой воронки очищенной водой немного выше метки, закрывают пробкой и выдерживают в течение 20 минут в термостате, в котором поддерживают постоянную температуру воды 20 C с точностью до 0.1 С. При этой температуре уровень воды в пикнометре доводят до метки, быстро отбирая излишек воды при помощи пипетки или свернутой в трубку полоской фильтровальной бумаги. Пикнометр снова закрывают пробкой и выдерживают в термостате еще 10 мин., проверяя положение мениска по отношению к метке. Затем пикнометр вынимают из термостата, фильтровальной бумагой вытирают внутреннюю поверхность горлышка пикнометра, а также весь пикнометр снаружи, оставляют под стеклом аналитических весов в течение 10 мин. и взвешивают с той же точностью. Пикнометр освобождают от воды, высушивают, споласкивая последовательно этанолом и эфиром (сушить пикнометр путем нагревания не допускается), удаляют остатки эфира продуванием воздуха, заполняют пикнометр испытуемой жидкостью и затем производят те же операции, что и с очищенной водой. Плотность Р (г / куб. см) вычисляют по формуле : Р20 = [[(M2 - М) *0.99703] / (M1 - M)] + 0,0012, где М - масса пустого пикнометра, г;M1 - масса пикнометра с очищенной водой, г; М2 - масса пикнометра с испытуемой жидкостью, г; 0.99703 - значение плотности воды при 20 С и барометрическом давление 1011 гПа (760 мм рт. ст.) 2.2.2.3. Определение сухого остатка. 5 мл жидкого экстракта помещают во взвешенный бюкс, выпаривают на водяной бане и сушат 3 ч. при (102.5 2.5) С, затем охлаждают в эксикаторе 30 мин. и взвешивают. 2.2.2.4. Определение тяжелых металлов К 1 мл жидкого экстракта или 1 г густого или сухого экстракта прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, осторожно сжигают и прокаливают. Полученный остаток обрабатывают при нагревании 5 мл насыщенного раствора аммония ацетата. Фильтруют через беззольный фильтр, промывают 5 мл воды и доводят объем фильтрата до 200 мл 10 мл полученного раствора должны выдерживать испытания на тяжелые металлы (не более 0.01 % в препарате). Результаты анализов по стандартизации жидких экстрактов лопуха войлочного на 25, 40, 70 % этаноле представлены в таблице № 5. Таблица 5 Стандартизация жидких экстрактов листьев лопуха войлочного, изготовленных на 25 %, 40 % и 70 % этаноле
Вывод: жидкие экстракты на 25, 40, 70 % этаноле удовлетворяют требованиям ГФ XI. 2.3. Исследования противовоспалительных свойств сухих экстрактов листьев и корней, полученных на 25 %, 40 %, 70 % этаноле, сухого водного раствора извлеченног из листьев лопуха войлочного 2.3.1. Характеристика воспалительного процесса Воспаление является защитно-приспособительной реакцией организма при различных повреждениях. Однако в ряде случаев восстановительные процессы переходят из нормальных в патологические и участвуют в формировании многих заболеваний. Воспалительный процесс - результат взаимодействия флогогенного начала и макроорганизма. Участие последнего зависит прежде всего от его реактивности, которая определяется состоянием регуляторных систем как высших, дистальных - нервной, эндокринной, иммунной, так и местных - физиологически активных веществ, выступающих в очаге воспаления в качестве медиаторов и модуляторов воспаления [Дыгай А.М., Клименко Н.А., 1992]. Большинство авторов в развитии воспаления выделяют следующие классические стадии: 1) повреждение тканей и клеток; 2) выделения медиаторов и реакция микроциркуляторного русла (сосудистая фаза); 3) проявления повышенной проницаемости - экссудации, миграции клеточных элементов (сосудисто-клеточная фаза); 4) пролиферация с последующей репарацией (фаза реконструкции) . При воздействии химического и физического раздражителя вслед за разрушением тканей (первичной альтерацией) происходит экссудация, затем - пролиферация и репарация, тогда как при действии биологических агентов процесс начинается чаще с экссудации, далее наступает расплавление тканей (вторичная альтерация) с последующей пролиферацией и репарацией. Вид воспаления зависит от причины, вызывавшей его, особенностей пораженной ткани, реактивности организма и др. На модели каррагенинового воспаления наблюдается три фазы выделения медиаторов: в первую фазу высвобождается гистамин и серотонин, во вторую - кинины. Простагландины являются посредником поздней фазы воспаления, развивающегося при каррагениновом отеке через 3 часа, максимум концентрации ПГЕ2 - через 12 - 24 часа. Активация этой третьей фазы воспаления зависит от включения в процесс системы комплемента [Чернух А.М., 1979]. Защитные реакции регулируются и нервно - гуморальными механизмами. В результате интеграции каскада реакций возникает комплекс сосудистых и клеточных реакций, характеризующих острое воспаление. При последующей ликвидации патогенетического агента развивается заключительная фаза воспалительного процесса - репарация, которая заканчивается заживлением дефектов ткани и прекращением реакций. Восстановительную (регенерационную) стадию воспаления лучше всего рассмотреть на модели заживления раневого повреждения, причем асептическая рана, в случае заживления первичным натяжением, имеет менее выраженную воспалительную реакцию, чем при заживлении вторичным натяжением [Фенчин К.М., 1979]. Для последнего характерно заживление раны вследствие выполнения дефекта грануляционной тканью, которая развивается в условиях открытого дефекта, она всегда соприкасается со внешней средой, будучи долго не покрытой эпителием, в то время как молодая соединительная ткань при первичном натяжении развивается под струпом или в условиях зашитой раны [Есипова И.К., 1966]. Если организм не способен удалить источник раздражения, то увеличивается выход в очаг воспаления полиморфноядерных лейкоцитов и выделение из них большого количества лизосомальных энзимов, вызывающих деструкцию тканей и развитие неспецифического хронического воспаления [Тринус Ф. П. и др., 1987]. В общем хроническое воспаление отличается тканевым ответом, характерным своей длительностью, развитием моноцитарного инфильтрата и пролиферацией соединительной ткани. Различают первичное хроническое воспаление и вторичное. Если повреждающий агент, вызывающий воспаление продолжает находиться в тканях, то развивается гранулема (гранулематозное воспаление). Развитие гранулемы является фазным: а) вокруг возбудителя образуется инфильтрат юных мононуклеарных фагоцитов; б) далее происходит созревание и скопление (агрегация) этих клеток с образованием зрелой гранулемы; в) дальнейшее созревание с формированием эпителиоидной гранулемы [Чернух А.М., 1979]. Развитие гранулемы происходит путем экссудации и пролиферации. Уже к 7 дням (а иногда и раньше) организуется зрелая гранулема (типа чужеродного тела). Существенное значение в патогенезе хронического воспаления принадлежит взаимодействию макрофагов и компонентов комплемента. На ранних этапах формирования гранулемы ведущая роль отводится метаболизму сульфатированных гликозаминогликанов. Таким образом, воспаление - сложный многоступенчатый процесс, представляющий собой динамический каскад биологических причинно - следственных явлений, проходящих в своем развитии через ряд стадий и фаз. Фармакодинамику противовоспалительных средств необходимо исследовать с учетом фазности воспалительных изменений и значения тех или иных процессов в развитии этих фаз [Тринус Ф.П. и др., 1987]. 2.3.2 Материалы и методы исследования Для исследования были использованы сухие экстракты и сухие водные извлечения, полученные ранее другими дипломниками. Опыты проводили на белых неинбредных мышах массой 20 - 25 гр. и крысах линии Wistar массой 250 - 300 гр., полученных из коллекционного фонда НИЛ экспериментального биомедицинского моделирования ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется). Острое асептическое воспаление вызывали введением под плантарный апоневроз левой задней лапки 1 % раствор каррагенина в объеме 0.05 мл мышам и 0.1 крысам . Величину отека определяли по разности масс воспаленной и невоспаленной лап животного, процент прироста рассчитывали по формуле: масса больной __ масса здоровой конечности конечности _____________________________________ х 100% масса здоровой конечности Репаративная способность препаратов изучена на модели заживления кожного повреждения [Фенчин К.М., 1979]. На депилированном участке кожи спины у мышей под легким эфирным наркозом вырезали лоскут кожи размером 10 x 10 мм. Для моделирования более длительного заживления струп регулярно (через сутки) снимали. О ходе заживления судили по среднему диаметру раны и срокам полной грануляции и эпителизации раневого дефекта. Укорочение срока заживления ран расчитывали в процентах по формуле: время полного заживления __ время полного заживления ран в контроле ран в опыте __________________________________________________________ х 100% время полного заживления ран в контроле Пролиферативное хроническое воспаление исследовали на модели "ватной" гранулемы. Стерильный ватный тампон (13 мг) имплантировали с помощью иглы (А1 -20 х 40 - 1 17 И25) крысам под кожу спины между лопатками. Исследуемые препараты вводились ежедневно со дня трансплантации в течение 7 дней. На 8 сутки животных забивали, гранулема вычленялась, взвешивалась в сыром и затем высушенном виде. Умерщвление животных производили методом дислокации цервикального отдела позвоночника. Результаты исследований обрабатывались методом непараметрической статистики Вилкоксона - Манна - Уитни. 2.3.3 Результаты исследования Изучение противовоспалительных и ранозаживляющих свойств растительных средств из лопуха войлочного проводили в условиях экспериментальных моделей патологических состояний у мышей и крыс. В работе воспроизводили острое асептическое воспаление (каррагениновое), хроническое пролиферативное ("ватная" гранулема) и регенерация кожного повреждения. В первой серии экспериментов регенеративную активность препаратов исследовали на модели кожного "лоскута" у мышей. Для моделирования длительного заживления струпы периодически снимали. В связи с этим раны заживляли вторичным натяжением, для которого характерно развитие грануляционной ткани [Фенчин К.М., 1979]. Беспородные мыши - самки, используемые в эксперименте, получали сухой экстракт корней 70, сухой экстракт корней 40, сухой экстракт корней 25, сухой экстракт листьев 70, сухой экстракт листьев 40, сухой экстракт листьев 25. Для сопоставления фармакологической активности все препараты вводились в одной дозе - 50 мг / кг в лечебном режиме: через час после нанесения кожного повреждения, затем ежедневно однократно до момента заживления. Растительные средства вводились внутрижелудочно (per os). Измерение раны проводили сразу же после снятия струпа, длительность наблюдения - 20 дней. У контрольных животных, которым вводилась дистиллированная вода, полное заживление ран наблюдали на 20 сутки (табл. 6, прилож.). Существенную активацию регенерации вызвал сухой экстракт листьев 25 - уже с 5 дня раны в 1.2 раза были меньше контрольных, а на 15 сутки - полное заживление у всех животных, т.е. на 28.6 % сокращались сроки регенерации. Аналогично и сухой экстракт корней 25 на 5 и 8 день достоверно снижал средний диаметр раны в 1.2 и 1.4 раза соответственно, но судя по срокам заживления процент ускорения репарации составил 9.6 % , как и в остальных исследуемых группах (кроме сухого экстракта листьев 70). Во второй серии экспериментов было изучено влияние растительных препаратов на хроническое воспаление, для воспроизведения которого использовали модель "ватной" гранулемы. Исследуемые извлечения вводились в меньшей дозе (25 мг / кг), с учетом коэффициента пересчета дозировки с мышей на крыс. Фитопрепараты и препарат сравнения - индометацин получали крысы -самки линии Wistar в лечебном режиме в течение 7 дней. Индометацин в исследуемой дозе обладал более выраженной антиэкссудативной активностью (37 % торможения), но не оказывал достоверного влияния на развитие грануляционной ткани (табл. 7, прилож.). Сухой экстракт корней 70 вызывал уменьшение массы сухого компонента на 21 % и на 26 % снижал содержание экссудата. Остальные извлечения из лопуха войлочного не оказали статистически значимого противовоспалительного эффекта на этой экспериментальной модели, хотя тенденция обнаружена у сухого экстракта корней 40 и сухого экстракта листьев 25. Дальнейшие исследования проведены с препаратами, полученными на основе листьев лопуха. На модели острого асептического воспаления, вызванного каррагенином сравнивали противовоспалительное действие спиртовых извлечений (сухого экстракта листьев 40, сухого экстракта листьев 25) и сухого водного извлечения из листьев. Препараты вводились в широком диапазоне доз: 100 мг / кг; 50 мг / кг; 10 мг / кг; 1 мг / кг в превентивном режиме курсом в течение 5 дней, в последний день через час после препарата вводился каррагенин. Наилучшее противоотечное действие на этой модели оказал сухой экстракт листьев 40, т. к. три дозы препарата оказались эффективными (табл. 8, прилож.) наибольший противоэкссудативный эффект оказал этот препарат при введении его в дозе 50 мг / кг - 37 % торможения прироста веса лапки в сравнении с контрольными животными. Несколько ниже эффект при введении его в дозах 10 и 1 мг / кг - 25 и 26 % соответственно. Волнообразный характер противовоспалительных эффектов у сухого экстракта листьев 25 на 29 % снижался отек под действием препарата в дозах 100 и 10 мг / кг; отсутствие эффекта в дозах 50 и 1 мг / кг. Сухое водное извлечение из листьев на этой патологической модели не проявило противовоспалительной активности. Таким образом, проведенные скрининговые исследования говорят о наличии фармакологической активности у спиртовых извлечений из лопуха войлочного. Неоднозначность эффектов говорит о их высокой избирательной активности зависящей от концентрации экстрагента и вида сырья. Так сухой экстракт корней 70 оказался более эффективным при хроническом воспалении, а сухой экстракт листьев 25 и сухой экстракт листьев 40 - при остром асептическом воспалении. Наилучший стимулятор репаративной регенерации - сухой экстракт листьев 25. Выявленная фармакологическая активность свидетельствует о перспективности данных препаратов и требует дальнейшего более углубленного их исследования. |
|